酵母双杂交还可以这么用？Y2H-seq 揭示不老松年龄。***小欧又给大家带来了一篇酵母双杂交结合高通量测序技术的应用文章。北京林业大学钮世辉老师团队，在传统的酵母双杂交技术流程基础上，巧妙的结合了NGS技术，优化建立了Y2H-seq技术，**缩短了常规的筛库后测序验证周期，节约了实验成本。文章中应用Y2H-seq技术，对不老松年龄密码进行了有趣的研究，其中所用酵母双杂交文库由欧易生物协助完成。众所周知，酵母双杂交技术是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交技术发现的。但是做过酵母杂交实验的小伙伴也都知道蛋白筛选较容易，但是筛选后，想知道获得的阳性克隆都对应的是啥基因，所花费的人力物力相当不小。有困难解决困难，勇敢牛牛不怕困难。欧易生物酵母文库拥有GAL4系统、泛素系统，单杂、双杂等多种酵母杂交筛选方法。浙江生物技术酵母文库做什么

进行了酵母双杂交文库的筛选，结果显示钙依赖的种子特异性蛋白激酶SPK可以与OsNF-YB9相互作用，分段截取互作验证显示OsNF-YB9的N端是互作所必须的（图a-b），并通过双荧光分子互补实验、BiFC、体外GST-pulldown实验得以证实（图c-e）。亚细胞定位显示SPK主要在细胞质中表达，OsNF-YB9在细胞质和细胞核中都有表达，共表达SPK和OsNF-YB9***促进了OsNF-YB9的入核（图f），表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促进了OsNF-YB9从细胞质向细胞核的运输。RT-PCR显示SPK在发育中的种子中高表达，在5DAF开始***，并在10-30DAF维持高表达水平（图a-b）。spk敲除突变体种子中垩白率的增加（图c-e），但粒形和粒重与野生型没有***差别。云南酵母文库领域文库质粒与酵母文库载体重组。

通过酵母双杂筛选实验，进一步研究AaWRKY9蛋白功能，结果筛选到了与AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通过Y2H、BiFC、CoIP等进行了验证确认。JAZs是JA介导的植物相应中的负向调控因子，在毛状体和老叶中高表达，在芽尖和嫩叶中表达量低。为确认AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促进青蒿素积累过程中的转录***功能，通过双荧光素酶报告基因检测实验发现，当AaWRKY9与AaJAZ9共表达时，其转录活性被抑制，而使用MeJA处理后，这种抑制作用被抵消，且AaWRKY9转录活性增强，反向验证实验结果一致。说明JA可以通过降解JAZ9，提高AaWRKY9转录活性，促进青蒿素生物合成。

通过传统的酵母双杂交系统，以PtDAL1为诱饵，筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆，10个一组，挑选到1个96孔板的PCR板孔中，获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板，进行PCR扩增，并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物，进行打断后构建二代测序文库，通过NGS测序，获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据，获得阳性克隆基因信息（去冗余后获得135个互作子，包含21个TFs，2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白，部分见表1）。挑选重要的候选基因进行一对一验证（图2）。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析，并对DIPs进行GO注释（图3）。综合生信分析结果，构建针叶树老化途径的调控模型（图4）。文库筛选经验 与上千所高校及科研院所合作 完成年均400多个物种的文库构建及筛选 。

酵母双杂交表明拟南芥AtBT2蛋白可以与AtRGA互作。与对照相比，拟南芥bt1/2双突变体幼苗高度降低，而硝酸盐处理可以进一步抑制其生长，外源施加GA可以回复其生长缺陷。在拟南芥中异源表达MdBT2可以明显提高植株高度，而PAC处理则会抑制这种生长的促进作用。在拟南芥中异源表达MdRGL3a可以明显抑制植株生长，而硝酸盐处理和MdBT2过表达则会缓解这种生长抑制作用。外源GA处理可以逆转以上对植株生长的影响（图A-D）。以上结果表明，BT蛋白通过DELLA蛋白调控植株生长，这一机制在不同的植物中具有保守性。酵母文库双杂交技术及应用。山西运用酵母文库做什么

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文章中酵母文库实验由欧易生物完成。2021 年 3 月，扬州大学陈忱教授为通讯作者，在 The Plant Journal 杂志（IF: 6.141）在线发表了题为“The rice LEC1-like transcription factor OsNF-YB9 interacts with SPK, an endosperm specific sucrose synthase protein kinase, and functions in seed development”的研究论文，报道了 OsNF-YB9 在调控水稻种子发育中的作用机制。NF-Y转录因子家族成员LEC1在拟南芥胚胎发生和种子发育中发挥了重要作用。水稻中的OsNF-YB9和OsNF-YB7是拟南芥LEC1的同源基因。这些LEC1同源基因在水稻中的作用尚未经报道。浙江生物技术酵母文库做什么

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